wwwa级片日韩免费一区_亚洲国产成人福利久久_久久精品国产亚洲AV麻豆蜜_亚洲AV日韩AV激情亚洲

所在位置: 首頁> 技術(shù)文章> BTX>
文章詳情

CAR-T 對(duì)實(shí)體瘤特異性治遼研究進(jìn)展

日期：2025-05-24 21:07
瀏覽次數(shù)：2223
摘要：嵌合抗原受體T細(xì)胞免役療法（CAR-T） 是將嵌合抗原受體（CARs） 導(dǎo)入T 細(xì)胞，通過對(duì)癌細(xì)胞表面抗原進(jìn)行特異性識(shí)別達(dá)到對(duì)癌細(xì)胞特異性殺傷效果，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌癥的特異性治遼。目前在急性林巴細(xì)胞白血病（ALL）、非霍奇金林巴瘤（NHL）、多發(fā)性骨髓瘤（MM）等血液學(xué)惡性腫瘤患者中顯示出****的治瑜率。隨著兩款靶向CD19的CAR-T細(xì)胞（Kymriah，Yescarta）被FDA批準(zhǔn)用于治遼B-ALL和DLBCL，CAR-T細(xì)胞治遼技術(shù)正在向綜合治遼方案以及其他惡性腫瘤適應(yīng)癥方面探索。 CAR-T機(jī)制 CAR-T細(xì)胞的制備：首先從患者身上分離出...
嵌合抗原受體T細(xì)胞免役療法（CAR-T） 是將嵌合抗原受體（CARs） 導(dǎo)入T 細(xì)胞，通過對(duì)癌細(xì)胞表面抗原進(jìn)行特異性識(shí)別達(dá)到對(duì)癌細(xì)胞特異性殺傷效果，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌癥的特異性治遼。目前在急性林巴細(xì)胞白血病（ALL）、非霍奇金林巴瘤（NHL）、多發(fā)性骨髓瘤（MM）等血液學(xué)惡性腫瘤患者中顯示出****的治瑜率。隨著兩款靶向CD19的CAR-T細(xì)胞（Kymriah，Yescarta）被FDA批準(zhǔn)用于治遼B-ALL和DLBCL，CAR-T細(xì)胞治遼技術(shù)正在向綜合治遼方案以及其他惡性腫瘤適應(yīng)癥方面探索。


CAR-T機(jī)制

    CAR-T細(xì)胞的制備：首先從患者身上分離出外周血林巴細(xì)胞，然后選擇性的擴(kuò)增其中的T細(xì)胞。一般來說，T細(xì)胞可以在10-42天內(nèi)擴(kuò)增100-1000倍。靶向目標(biāo)抗原的基因序列，將在擴(kuò)增過程的早期**入T細(xì)胞。隨后，T細(xì)胞將在細(xì)胞表面表達(dá)CAR分子，結(jié)構(gòu)上包括胞外抗原結(jié)合域、跨膜錨定域和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)域（圖1）。


CAR-T 療法的生產(chǎn)分四階段完成:
a.從患者體內(nèi)獲取一定量的血液，加入抗凝劑防止血液凝固，用白細(xì)胞分離術(shù)以除去血液中的血小板和紅細(xì)胞，獲得外周血單核細(xì)胞（PBMC)；
b. 從PBMC 中分離出CD4陽性T細(xì)胞和CD8陽性T細(xì)胞，通過進(jìn)一步富集確保分離的T細(xì)胞中不含非林巴細(xì)胞并在一定條件下進(jìn)行體外培養(yǎng)，利用IL-2、CD3等激活T細(xì)胞；
c.利用電穿孔、慢病毒載體等方法將CAR的mRNA或DNA導(dǎo)入T細(xì)胞，mRNA在胞質(zhì)中經(jīng)核糖體翻譯后表達(dá)CAR，DNA通過整合到T細(xì)胞的基因組中使T 細(xì)胞能夠表達(dá)CAR；
d. 對(duì)獲得的CAR-T 細(xì)胞進(jìn)行免役分型、存活力、內(nèi)**等方面的檢測(cè)，在確保生產(chǎn)的CAR-T細(xì)胞純度和安全性后回輸給患者，實(shí)現(xiàn)CAR-T免役治遼。

CAR-T療法的治遼過程


CAR-T在實(shí)體瘤的發(fā)展

    CAR-T治遼已經(jīng)在臨床上得到應(yīng)用，作為有效治遼腫瘤的方法之一，在血液瘤的治遼上體現(xiàn)出較好的療效，對(duì)實(shí)體瘤也體現(xiàn)出一定的治遼效果。
    美國貝勒醫(yī)學(xué)院細(xì)胞和基因治遼中心在免役缺陷小鼠上建立HER2陽性的多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤（GBM） 異種移植模型并注射自體HER2 CART細(xì)胞，結(jié)果顯示：HER2CAR-T細(xì)胞能夠識(shí)別并消除源于HER2 陽性GBM的CD133 陽性與CD133陰性細(xì)胞，而HER2陰性的腫瘤細(xì)胞存活。這表明HER2 CAR-T細(xì)胞對(duì)HER2陽性腫瘤具有有效的抗腫瘤活性。此外，以碳酸酐酶-Ⅸ（CAⅨ）、神經(jīng)節(jié)苷脂（GD2）、白介素13受體α2 （IL13Rα2）和癌胚抗原（CEA） 為特異性位點(diǎn)的CAR-T已制備成功并用于轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和肝轉(zhuǎn)移瘤的治遼研究，以此探索CAR-T治遼的相關(guān)機(jī)制、療效以及安全性?？偟膩碚f，全球目前已經(jīng)有至少22個(gè)靶點(diǎn)被陸續(xù)應(yīng)用于實(shí)體腫瘤的CAR-T治遼，部分研究已經(jīng)發(fā)表，部分仍在進(jìn)行中，包括：FR-α,CAIX, L1-CAM, MSLN, HER2, EGFR, EGFRvIII, IL13Rα2, CEA, GD2, MUC1, PSMA, PSCA,FAP, CD133, cMET, EphA2, GPC3, VEGFR-2, ROR1, EpCAM, MUC16。

按照器官分類的被考慮/試驗(yàn)的可能的實(shí)體腫瘤CAR-T細(xì)胞治遼靶點(diǎn)

    CAR-T 療法雖然在血液瘤和實(shí)體瘤治遼中均取得了一定的成效，各種不同類型的CAR被設(shè)計(jì)，但是仍存在瓶頸難題有待突破.這些障礙包括：1. 脫靶毒性（on-target/off-tumor） 這是CAR-T治遼中亟待解決的問題。脫靶毒性表現(xiàn)為CAR-T細(xì)胞攻擊其他表達(dá)目標(biāo)抗原的正常細(xì)胞，使正常細(xì)胞死亡甚至對(duì)臟器造成損傷，嚴(yán)重時(shí)危及患者生命；2. 細(xì)胞因子釋放綜合征。CRS是CAR-T治遼后常見的毒副作用并且會(huì)由低等級(jí)的全身癥狀向高等級(jí)發(fā)展，癥狀嚴(yán)重時(shí)會(huì)產(chǎn)生呼吸窘迫綜合征，引起肝臟損傷以及血管內(nèi)凝血致命的臨床癥狀；3.實(shí)體瘤微環(huán)境中的有效激活；CAR-T對(duì)腫瘤的免役效果不明顯的原因之一是腫瘤微環(huán)境的存在。TME由腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、炎癥細(xì)胞以及基質(zhì)細(xì)胞等組成，影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。在CAR-T細(xì)胞免役腫瘤的過程中，腫瘤微環(huán)境通常阻止林巴細(xì)胞有效的啟動(dòng)，阻礙效應(yīng)T細(xì)胞的浸潤，此外，已經(jīng)浸潤至腫瘤的細(xì)胞會(huì)受到腫瘤微環(huán)境的再次影響，引起CAR-T細(xì)胞的耗竭，導(dǎo)致宿主無法排斥腫瘤；4.人體內(nèi)CAR-T細(xì)胞的持久性。 
    盡管如此，CAR-T細(xì)胞療法仍然是復(fù)發(fā)和難治性惡性腫瘤的一個(gè)令人興奮的治遼選擇，使用CAR-T細(xì)胞療法治遼惡性實(shí)體腫瘤也出現(xiàn)了一些很好的結(jié)果。未來CAR-T細(xì)胞治遼實(shí)體腫瘤的研究應(yīng)側(cè)重于方法的創(chuàng)欣，以應(yīng)對(duì)實(shí)體腫瘤特有的挑戰(zhàn)。

    CAR-T在其制備過程中可通過電穿孔、慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，將CAR基因?qū)牖颊咦陨矸蛛x出的T細(xì)胞里使T細(xì)胞經(jīng)改造后能夠表達(dá)CAR基因. 但這三種方法具有各自的特點(diǎn)。


                                                           制備CAR-T細(xì)胞的三種方法的特點(diǎn)


    電穿孔法采用直接將mRNA導(dǎo)入T 細(xì)胞實(shí)現(xiàn)CAR瞬時(shí)表達(dá)而且不存在基因組的整合，使得DNA誘變的可能性非常低。該方法制備的CAR-T在實(shí)體瘤的治遼中體現(xiàn)出一定的抗腫瘤活性。艾布拉姆森癌癥中心用電穿孔法制備靶向間皮素的CAR-T細(xì)胞，靜脈給藥后短暫存留于外周血并遷移至原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性腫瘤位點(diǎn)，兩例病例報(bào)告中因其未出現(xiàn)明顯的脫靶毒性，證明了它的安全性和可行性。賓夕法尼亞大學(xué)醫(yī)學(xué)院用電穿孔法制備CAR-T，通過多次注射成功使大血管化側(cè)腹間皮瘤出現(xiàn)消退的現(xiàn)象。Nicole Bidmon等人在2018年發(fā)表的文章中使用BTX電穿孔設(shè)備制備CAR-T，轉(zhuǎn)染效率達(dá)到了97.3%，活率達(dá)到了96%。


Performed by BTX Electroporator

Bidmon et al., 2018


    BTX提供先進(jìn)的電穿孔解決方案，AgilePulse Max系統(tǒng)是專為大容量轉(zhuǎn)染而設(shè)計(jì)的，用于快速、高效地轉(zhuǎn)染20ul至10ml的細(xì)胞懸液。該系統(tǒng)簡單易用，可在電極杯、flatpack電擊室或者AgilepulseMax配備的大容量電擊室里完成細(xì)胞轉(zhuǎn)染。該系統(tǒng)還具有磚利的PulseAgile分段脈沖導(dǎo)入技術(shù)，首先通過一系列短而高強(qiáng)度脈沖增加細(xì)胞膜通透性，再利用低強(qiáng)度脈沖促進(jìn)質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞，PulseAgile的磚利技術(shù)在保證高效的基因?qū)胪瑫r(shí)，還能以很小的升熱量和很短的循環(huán)時(shí)間來醉大化提高細(xì)胞活性，以確保在進(jìn)一步的細(xì)胞處理中具有高的細(xì)胞存活率。因此AgilePulse Max成為高效快速制備CAR-T的選擇。


BTX AgilePulse Max

產(chǎn)品特性

獨(dú)特大體系轉(zhuǎn)染室

-可以一次性高效完成多至10ml樣品的轉(zhuǎn)染

獨(dú)特的轉(zhuǎn)染緩沖液

-CytoporationMedium T專業(yè)轉(zhuǎn)染液保證高的轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率 

觸摸屏設(shè)計(jì)

-觸摸屏設(shè)計(jì)，輕松設(shè)置參數(shù)




參考文獻(xiàn)

[1] Beatty G L, Haas A R, Maus M V, etal. Mesothelin-specificchimeric antigenreceptor mRNA- engineered T cells induce antitumor activity in solid malignanciesgregory. Cancer Immunol Res, 2015, 2(2): 112-120

[2]ZhaoY, Moon E, Carpenito C, et al. Multiple injections of electroporatedautologous T cells expressing a chimeric antigen

receptor mediate regression of humandisseminated tumor. Cancer Res, 2011, 70(22): 9053-9061

[3] Ahmed N,SalsmanVS, KewY, et al. HER2-specific T cells target primaryGlioblastoma stem cells and induce regression of autologous experimentaltumors. Clin Cancer Res, 2010, 16(2):474-485

[4] Lamers C H,Sleijfer S, Steenbergen S V, et al. Treatment of metastatic renal cellcarcinoma with CAIX CAR-engineered T cells: clinical evaluation and managementof on-target toxicity. MolTher, 2013, 21(4): 904-912

[5] Louis C U, Savoldo B, Dotti G, etal. Antitumor activity and longterm fate of chimeric antigen receptor –positiveTcellsin patients

with neuroblastoma. Blood, 2011, 14(11):1324-1334

[6] Brown C E, Alizadeh D, Starr R, etal. Regression of glioblastoma after chimeric antigen receptor T-Celltherapy. N Engl J Med,

2016, 375(26): 2561-2569

[7] Katz S C, Burga R A, McCormackE, et al. Phase I hepatic immunotherapy for metastases study of intra -arterial chimeric antigen receptor modified T cell therapy for CEA+ liver metastases.Clin Cancer Res, 2015, 21(14):3149-3159

[8] Neelapu S S, Tummala S, KebriaeiP, et al. Chimeric antigen receptor T-cell therapy-assessment andmanagement of toxicities.

Nat Rev Clin Oncol, 2018, 15(1):47-62

[9] Xu X J, Tang Y M. Cytokinerelease syndrome in cancer immunotherapy with chimeric antigen receptorengineered Tcells. Cancer Lett, 2014, 343(2): 172-178

[10] Nicole Bidmon, Sonja Kind,Marij J.P. Welters, Deborah Joseph-Pietras, Karoline Laske, Dominik Maurer,Sine Reker Hadrup, Gerty Schreibelt, Richard Rae, Ugur Sahin, CécileGouttefangeas, Cedrik M. Britten, Sjoerd H. van der Burg, Development of anRNA-based kit for easy generation of TCR-engineered lymphocytes to controlT-cell assay performance, Journal of Immunological Methods, Volume 458, 2018,Pages 74-82







滬公網(wǎng)安備 31010502003083號(hào)